Histopathology Staining Explained H&E and IHC Staining

组织病理学染色解释：H&E 和 IHC 染色

组织病理学染色有助于在微观水平上识别和理解组织的结构和功能。组织病理学染色绝对是医学研究和诊断领域的基石。

这篇博文深入探讨了组织病理学染色领域，重点关注两种最常见的染色技术：HE 染色和 IHC 染色。

通过这篇文章，您将清楚地了解这些方法及其在该领域的意义。

什么是组织病理学染色？

组织病理学染色是一种用于增强组织样本对比度的技术，可以在显微镜下进行详细检查。这个过程有助于诊断疾病、了解组织结构和进行各种研究应用。

组织学染色的目的是什么？

组织学染色对于突出组织样本中的不同成分至关重要。从历史上看，染色技术已经从基本染料发展到可以识别特定细胞类型和分子标记的先进方法。如今，染色用于医学诊断、癌症研究和病理学，以提供对组织形态和病理学的详细了解。

组织病理学染色方法

组织病理学利用多种染色方法，每种方法都旨在突出组织样本的特定特征。这些方法对于详细的显微镜检查和诊断至关重要。以下是一些关键的组织病理学染色技术：

  1. 苏木精与伊红（HE）染色
  2. 免疫组织化学 (IHC) 染色
  3. 过碘酸-希夫 (PAS) 染色
  4. Masson染色
  5. 银染

苏木精与伊红（HE）染色

苏木精和曙红 (H&E) 染色是组织病理学的绝佳标准。该方法使用两种染料：

  • 苏木精：将细胞核染成蓝色或紫色，强调 DNA 和核结构。
  • 伊红：将细胞质和细胞外基质染成粉红色或红色，提供对比度并强调其他细胞成分。

HE 染色提供了组织结构的全面视图，使病理学家能够识别各种细胞类型、组织结构和异常。它广泛用于常规检查和诊断。

免疫组织化学 (IHC) 染色

免疫组织化学 (IHC) 染色是一种强大的技术，它使用抗体来检测组织中的特定抗原。该过程涉及：

  • 一抗：与组织内的目标抗原结合。
  • 二抗：连接到与一抗结合的检测系统（例如酶或荧光染料）。

IHC 染色可提供精确的分子信息，对于诊断疾病、识别生物标志物和开展研究具有不可估量的价值。它广泛用于肿瘤学中检测癌症标志物和研究蛋白质表达。

过碘酸-希夫 (PAS) 染色

过碘酸-希夫 (PAS) 染色用于检测组织中的多糖、粘液物质和糖蛋白。 PAS 染色强调以下几点：

  • 糖原：存在于肝脏和肌肉组织中。
  • 粘蛋白：存在于上皮组织中，有助于识别产生粘蛋白的肿瘤。
  • 基底膜：对于评估上皮层和内皮层的完整性和结构至关重要。

PAS 染色常用于病理学中诊断糖原贮积病、真菌感染和某些类型的肿瘤等疾病。

Masson染色

Masson染色可区分肌纤维、胶原纤维和红细胞。该方法涉及：

  • 三种染料：每种染色剂都会染色不同的组织成分。
  • 肌肉纤维：染成红色。
  • 胶原纤维：染成蓝色或绿色。
  • 红血球：染成红色或黄色。

这种染色技术对于评估纤维化、肌肉疾病和肝脏活检特别有用。它使结缔组织及其与其他组织成分的关系能清晰地可视化。

银染

银染是一种用于突出网状纤维、神经细胞和微生物的特殊方法。它涉及银盐的使用，其中：

  • 与组织成分结合：形成可见沉淀。
  • 网状纤维：染成黑色，有助于诊断某些结缔组织疾病。
  • 神经细胞：在神经组织检查中可视化。
  • 微生物：在传染病研究中发现。

银染色在神经病理学、微生物学以及检测组织内的精细结构方面特别有价值。

组织学中最常用的染色剂

组织学中最常用的染色剂是 HE 和 IHC 染色。 HE 染色和 IHC 染色因其广泛的应用和在揭示组织结构和分子细节方面的有效性而脱颖而出。

What is H&E Staining?

苏木精和曙红 (HE) 染色是一种用于区分组织样本中细胞核和细胞质的技术。苏木精将细胞核染成蓝色，而伊红将细胞质和细胞外基质染成粉红色。

Why Do We Do H&E Staining?

HE 染色之所以重要，有以下几个原因：

  • 细胞类型的鉴定：根据颜色和形态区分各种细胞类型。
  • 组织结构：提供组织结构的详细视图。
  • 病理诊断：对于揭示组织样本的异常情况来诊断疾病至关重要。

How to Do H&E Staining - H&E Staining Procedures

HE 染色程序是一个多步骤过程，需要精确性和对细节的关注，以确保高质量的结果。以下是每个步骤的详细分解：

  1. 组织固定
  2. 脱水
  3. 透明化
  4. 石蜡包埋
  5. 切片
  6. 染色
  7. 封片

1. 组织固定

固定是 H&E 染色的第一步，也是关键的一步。它涉及保存组织样本以防止自溶和降解。该过程通常使用福尔马林（甲醛溶液）等固定剂来稳定和保存组织结构和细胞成分。

步骤：:

  • 将组织样本浸入 10% 中性缓冲福尔马林中指定的时间（通常 6-24 小时，具体取决于组织的大小和类型）。

2. 脱水

固定后，组织必须脱水以除去与后续步骤中使用的石蜡不相容的水分。这是通过使用一系列分级的酒精溶液来逐渐去除组织中的水分而不会造成损坏。

步骤：:

  • 将组织依次置于不同浓度的乙醇（70%、80%、90%、95% 和 100%），在每种溶液中花费约 1-2 小时。

3. 透明化

透明化使用与酒精和石蜡混溶的溶剂。此步骤通常使用二甲苯使组织透明并准备将其包埋在石蜡中。

步骤：:

  • 将组织浸入二甲苯中 1-2 小时，重复此步骤以确保完全透明。

4. 石蜡包埋

这个步骤将组织包裹在石蜡中，为薄切片提供支持。这会产生适合切成薄片的固体组织块。

步骤：:

  • 将组织放入的熔化石蜡中，温度为60摄氏度，使蜡完全渗透组织。然后，将组织放入充满石蜡的模具中并使其凝固。

5. 切片

切片涉及使用切片机将石蜡包埋的组织切成薄片，以产生适合显微镜检查的薄片（通常为 4-5 微米）。

步骤：:

  • 将石蜡块安装在切片机上，小心地将组织切成薄片。将切片放在 40-45°C 的水浴上使其变平，然后将其放在载玻片上。

6. 染色

染色是核心步骤，将苏木精和伊红应用于组织切片以突出不同的细胞成分。苏木精用于将细胞核染成蓝色/紫色，伊红用于将细胞质和细胞外基质染成粉红色/红色。

步骤：:

  • 苏木精染色：将组织载玻片浸入苏木精中 5-10 分钟。用水冲洗。
  • 分化：将载玻片短暂浸入酸性酒精中以去除多余的染色剂，然后用水冲洗。
  • 反蓝：将载玻片浸入弱碱性溶液（例如氨水）中，使苏木精显蓝色。用水冲洗。
  • 伊红染色：将载玻片浸入伊红中 1-5 分钟。用水冲洗。

7. 封片

封片是将染色的组织切片放在载玻片上，以便在显微镜下观察。

步骤：:

  • 脱水和透明化：：通过增加浓度的乙醇（95% 和 100%）快速对载玻片进行脱水，然后在二甲苯中进行透明化。
  • 封片：在组织切片上滴一滴封固剂，并在上面放置盖玻片，确保没有气泡。

H&E Stain Services

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什么是IHC染色？

免疫组织化学 (IHC) 染色是一种使用抗体来检测组织切片中特定抗原的方法，可实现蛋白质和其他分子的可视化。

我们为什么进行IHC 染色？

IHC 染色的作用是：

  • 识别特定蛋白质：检测细胞内的蛋白质和其他分子。
  • 研究应用：用于癌症研究，研究生物标志物的表达。
  • 诊断：通过识别异常蛋白质表达来帮助诊断各种疾病。

如何进行 IHC 染色 - IHC 染色程序

免疫组织化学 (IHC) 染色是一个详细的过程，其通过使用抗体让组织切片内的特定抗原可视化。以下是每个步骤的全面细分：

  1. 抗原修复
  2. 蛋白封闭
  3. 一抗孵育
  4. 二抗孵育
  5. 可视化
  6. 复染
  7. 封片

1. 抗原修复

抗原修复是对于揭示固定过程中可能掩盖的抗原至关重要，使抗体能够接触到它们。

步骤：:

  1. 热诱导表位修复法 (HIER)：使用微波炉、高压锅或水浴加热缓冲溶液（通常是柠檬酸盐或 EDTA）中的组织切片。典型条件为 95-100°C，持续 10-20 分钟。
  2. 酶法修复：用特定浓度和孵育时间的酶（例如蛋白酶 K 或胰蛋白酶）处理组织切片。

2. 蛋白封闭

封闭对于防止抗体与组织的非特异性结合至关重要，因为其可能导致背景染色。

  • 步骤：：将组织切片与封闭缓冲液（通常含有血清、BSA 或脱脂奶粉）在室温下孵育 30 分钟至 1 小时。

3. 一抗孵育

一抗孵育步骤涉及应用与目标抗原特异性结合的一抗。

步骤：:

  1. 制剂：用适当的抗体稀释剂稀释一抗。
  2. 孵育：将稀释的一抗滴加到组织切片上并孵育指定时间（通常为室温下 1 小时或 4°C 过夜），确保均匀覆盖。

4. 二抗孵育

此步骤涉及应用与检测系统连接并与一抗结合的二抗。

步骤：:

  1. 制剂：用适当的抗体稀释剂稀释二抗。
  2. 孵育：将稀释的二抗滴加在组织切片上，室温孵育 30 分钟至 1 小时。

5. 可视化

可视化使抗原和抗体之间的相互作用变得可见，并使用显色或荧光方法检测和可视化结合的抗体。

步骤：:

  1. 免疫显色检测：应用显色底物（例如 DAB 或 AEC），与二抗连接的酶（例如 HRP 或 AP）发生反应，在抗原与抗体结合位点产生有色沉淀。孵育直至达到所需的强度，然后用水冲洗。
  2. 免疫荧光法：应用荧光标记的二抗并使用荧光显微镜观察。不同的荧光团可用于标记同一组织切片中的多个目标。

6. 复染

6. 复染复染添加对比染料以突出组织形态并为抗原染色提供背景。

步骤：:

  1. 苏木精复染：将载玻片浸入苏木精中一小段时间（30 秒至 2 分钟），然后用水冲洗。这会将细胞核染成蓝色并提供对比度。
  2. 荧光复染：对荧光标记的组织使用 DAPI 或 Hoechst 等核染色剂。

7. 封片

封片让染色的组织切片为显微镜检查做好准备并保存它们。

  • 步骤：:
    1. 脱水和透明化（用于显色染色）：通过增加浓度的乙醇（95% 和 100%）快速对载玻片进行脱水，然后在二甲苯中进行透明化。
    2. 封固剂：在组织切片上滴一滴封固剂（水性或树脂型，具体取决于检测方法）。
    3. 封片：：将盖玻片放在上面，确保没有气泡。

IHC 染色服务

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High-Quality H&E and IHC Staining Services - MYmAb Biologics

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